Asociación de mayores niveles de Rankl y Linfocitos T CD4+ en periodontitis

Abstract

Propósito: La periodontitis es una enfermedad infecciosa que involucra una sobrerespuesta inmune del hospedero y se caracteriza por la destrucción de los tejidos de soporte del diente. Durante su desarrollo se establece un denso infiltrado celular mononuclear donde el 70% lo constituyen los linfocitos de tipo T, con la capacidad de secretar una serie de citoquinas que participan en los eventos patogénicos de la enfermedad, regulando la inflamación de los tejidos periodontales y la destrucción del hueso alveolar. El objetivo del presente estudio es determinar si en la periodontitis crónica se observan mayores niveles de RANKL y si estos se encuentran asociados a los linfocitos T CD4+ reclutados en los sitios con enfermedad periodontal.

Material y Método: En 20 individuos con periodontitis crónica y en 12 individuos controles voluntarios y periodontalmente sanos se determinaron los niveles de mRNA de RANKL mediante RT-PCR tiempo real, se aislaron células gingivales totales para inmunotipificar y cuantificar los leucocitos infiltrantes gingivales y los linfocitos T CD4+ y CD8+ a través de citometría de flujo, en sobrenadantes de cultivos celulares, sin estimular y estimulados con LPS, PHA, extracto bacteriano de Pg e inter-leuquinas 2 y 15, se detectaron los niveles de RANKL mediante ELISA, y se determinó la expresión de RANKL, de células T CD4+ y se colocalizó inmunoreacción positiva para RANKL en linfocitos CD4+ mediante inmunohistoquímica.

Resultados: Los pacientes con periodontitis mostraron mayores niveles de mRNA de RANKL (Ct y ΔCt) evaluado mediante RT-PCR (28,791 ± 3,27 vs. 36,514 ± 2,67 y 7,113 ± 3,00 vs. 15,009 ± 2,80, respectivamente) en comparación a individuos periodontalmente sanos, observándose mediante el método 2-ΔΔCt que la expresión de RANKL se incrementó en 238,3 (29,8-1903,4) veces con relación a los sujetos controles. Los individuos con periodontitis mostraron mayores niveles (%)de linfocitos totales (58,5 ±18,45 vs. 41,5 ± 0,89) y de linfocitos T CD4+ y CD8+ (29,1 ± 17,78 vs. 4,6 ± 0,25 y 13,7 ± 7,23 vs. 3,3 ± 0,15, respectivamente), y en cultivos celulares se observaron mayores niveles de RANKL (pg/ml) espontáneos (18,4 ± 5,79 vs. 8,0 ± 1,34) y estimulados con LPS y PHA (33,8 ± 7,30 vs. 21,0 ± 5,60 y 30,1 ± 7,77 vs. 14,5 ± 3,57, respectivamente), en comparación con los individuos periodontalmente sanos. Mediante inmunohistoquímica se observó una mayor inmunoreacción para RANKL y para CD4 en individuos con periodontitis y una clara colocalización de RANKL en linfocitos T CD4+.

Conclusión: Estos datos demuestran que mayores niveles de RANKL se encuentran asociados a la periodontitis y que estos mayores niveles se pueden explicar en parte a la actividad de los linfocitos T CD4+ en el sitio de la infección. Ladeterminación de la asociación entre la periodontitis y la síntesis de RANKL constituye un interesante mecanismo molecular que contribuye a explicar en parte la destrucción tisular asociada y permite proyectar posibles nuevas estrategias terapéuticas, mediante la utilización de inhibidores de la actividad de RANKL, tal como osteoprotegerina (OPG), queayudarían a controlar la pérdida de tejido característica de la enfermedad periodontal.